EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色无内毒素质粒大提试剂盒

彩色无内毒素质粒大提试剂盒 核酸提取

目录号：31115-10

产品内容：

保存条件：

在室温(15~25℃)干燥条件下，可保存12个月。

RNaseA，可常温运输，-20℃保存。

产品简介：

本试剂盒用于无内毒素质粒DNA 的大量制备，柱上去除内毒素，操作简单。菌体经改良的碱裂解处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质，最后得到高纯度的无内毒素质粒DNA，所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。

小质粒（<10kb），拷贝数高，100ml菌液通常能提到500-1500ug质粒；大质粒（>10kb），拷贝数低，200ml菌液通常能提到200-600ug质粒。

产品特点：

1.du特工艺配方清除内毒素，内毒素含量极低（< 1EU/ugDNA），细胞转染效果ji佳。

2.得率高：150–300ml菌液可提出多达500–2000ug的纯净质粒；

重要提示：

一、使用前检查SolutionII和SolutionN3是否出现沉淀，如有沉淀37℃加热溶解后再用。

二、shou次使用前，请先在Buffer WB2中加入无水乙醇（详见瓶身标签），混匀，并做好标记。

三、shou次使用请先将RNaseA全部加到SolutionI中，混匀，每次使用后置于2~8℃保存。

操作步骤：

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入2.5 ml的Buffer BL，10,000 rpm离心2 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。

2.取100~150ml（最多200ml）过夜培养的菌液，室温10,000rpm离心2min，弃上清，收集菌体。

（注意：如果菌液浓度高，收集100ml的菌体即可,菌液浓度低，收集150-200ml菌液。）

3.加入10 mlSolution I，重悬菌体沉淀，涡旋震荡至che底悬浮，呈现出均匀浑浊的棕红色。

（注意：如有未che底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

4.加入10ml SolutionII，颠倒混匀使菌体wan全裂解，直到溶液变清亮、粘稠的紫红色。

（注意：不可Votex 剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 片段的污染，所用时间不要超过 5min，以免质粒受到破坏，如未wan全变得清亮，可能是菌体太多，可增加Solution II的用量，在后续的操作中Solution N3的用量也要相应增加）

5.加入10 mlSolutionN3，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的絮状物产生，继续混匀直

到wan全变为黄色，静置2min，然后室温10,000rpm离心10min，小心取上清至新管。

（注意：离心后在最上层可能会出现一层漂浮膜，注意不要倒入吸附柱）

6.加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。分两次（每次不超过10ml）转入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000rpm离心1min，质粒被吸附在膜上，弃滤液，直到所有混合溶液通过此吸附柱。

7.向吸附柱中加入5mlToxinOutBuffer，室温10,000rpm离心1min，弃滤液。

8.加入10mlBufferWB2，室温10,000rpm离心1min，弃滤液。

（注意：BufferWB2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

9.加入5mlBufferWB2，室温10,000rpm离心1min，弃滤液。

10.将吸附柱放进收集管，室温10,000 rpm离心5min，甩干膜上残留乙醇。

11.将吸附柱置于一个新的50ml离心管（自备）中，打开管盖，室温晾干5min，以免残留乙醇影响下游应用。

12.加入1~2ml的洗脱液BufferEB，室温放置2min，12,000rpm离心2min，离心管底溶液即质粒DNA。

（注意：事先在65~70℃水浴中预热洗脱缓冲液 EB，可增加洗脱效率；

如果需要较多量质粒，可将得到的质粒溶液重新加入吸附柱中，重复收集3次，可获得最大洗脱率；如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间。

彩色无内毒素质粒大提试剂盒 核酸提取